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細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的問題~~

24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn)，是污染嗎?首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。25、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，不要...

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胎牛血清常見問題集合~

①保存血清最好方法是什么？我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時(shí)，請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi)，再放回冷凍。反復(fù)凍融會(huì)對血清的品質(zhì)造成不良影響。②如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？我們建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。③血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？血清在解凍過程（包括沒有*解凍）或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各...

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經(jīng)費(fèi)不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清

經(jīng)費(fèi)不是很充足，但是用量也蠻大，怎么選血清這個(gè)是最多的一個(gè)群體，有些老師有錢，但是這個(gè)錢也是自己辛辛苦苦取得的，所以我覺得可以考慮一些小品牌，但是小品牌不代表是假貨，不代表是國產(chǎn)，也不代表是假洋品牌。買的初期，需要去多找?guī)讉€(gè)牌子的試用裝同時(shí)測試。教你一眼判斷血清的質(zhì)量淡黃色，透明——2小時(shí)以內(nèi)的國產(chǎn)新生牛血清，膽紅素含量較少；金黃色，透明——產(chǎn)下較長時(shí)間的新生牛血清，一般超過2小時(shí)了；金黃色，不透明——產(chǎn)下幾天或更久的小牛血清；淡黃色，帶一點(diǎn)微紅，透明——等級高的進(jìn)口胎牛血清...

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WinSeran細(xì)胞培養(yǎng)常見兩個(gè)問題（抱團(tuán)+空泡問題）

WinSeran細(xì)胞培養(yǎng)常見兩個(gè)問題（抱團(tuán)+空泡問題）細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15ml離心管中，靜置20min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正常...

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如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？

如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？原則上：直接滅菌后丟棄之。當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基...

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細(xì)胞培養(yǎng)中，黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?

黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?如果判定黑點(diǎn)是污染，請及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600rpm/min，5-6min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600rpm...

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27個(gè)細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

1、一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。2、何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。3、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?一般情況下細(xì)胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜...

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如何確認(rèn)細(xì)胞交叉污染

交叉污染雖不如微生物污染普遍，但與HELA細(xì)胞及其他生長迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是個(gè)明確的問題，會(huì)造成嚴(yán)重后果。從聲譽(yù)好的細(xì)胞庫獲取細(xì)胞系、定期檢查細(xì)胞系性質(zhì)及采用良好的無菌技術(shù)有助于避免交叉污染。通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認(rèn)有無交叉污染。血清與培養(yǎng)基通常血清的添加比例為10%，當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時(shí)，最好需對血清的品質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，防止對實(shí)驗(yàn)造成影響。對于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如...

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