2022-811
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言,胎牛血清的重要性不言而喻。胎牛血清既是讓細(xì)胞快樂成長(zhǎng)的需要營(yíng)養(yǎng)物,又是可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡的“原因”。辛苦養(yǎng)起來的細(xì)胞可能因?yàn)樘ヅQ逵缅e(cuò)而一切歸零……那么胎牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)最關(guān)鍵的原料之一,胎牛血清的質(zhì)量直接決定培養(yǎng)細(xì)胞的成敗,千舍生物為各科研人員推薦以下幾款血清:一、干細(xì)胞專用胎牛血清(低內(nèi)毒素FBS500-WE-002(ES))千舍生物嚴(yán)格控制胎牛血清的來源,做好檢驗(yàn)檢疫與溯源等工作,心臟穿刺采血低溫分離,3次0.1μm無菌過濾,內(nèi)毒素≤3EU/ml,可...
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2022-83
原理:當(dāng)待測(cè)細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時(shí),通過測(cè)定一定體積懸液中的細(xì)胞的數(shù)目即可換算出每mL細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量。操作步驟:1.將計(jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上;2.輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出少許細(xì)胞懸液滴在細(xì)胞入口,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間,靜置1-2min,使細(xì)胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中;3.在顯微鏡下對(duì)A/B/C/D四個(gè)大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計(jì)數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞(如右側(cè)和下方...
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2022-83
一、貼壁細(xì)胞傳代(以一個(gè)T25瓶為例)1、吸出原培養(yǎng)液;2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;3、加入1ml左右胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞,放入培養(yǎng)箱消化;4、消化時(shí)間跟據(jù)細(xì)胞特性有所不同,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓,側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫落并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞,使之盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液,這時(shí)可以在顯微鏡看下;6、收集細(xì)胞懸液離心,1...
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2022-83
1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺(tái)用紫外燈照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面,并開啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5-10min再開始實(shí)驗(yàn)操作。2.實(shí)驗(yàn)用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺(tái)內(nèi);實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)移出超凈臺(tái),以利于空氣的流通;實(shí)驗(yàn)完成后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面。3.每次操作只處理一種細(xì)胞;即使不同細(xì)胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基,避免細(xì)胞間的交叉污染。4.操作時(shí)小心取用無菌的物品,避免污染。勿碰觸吸管尖頭,不小心碰觸后應(yīng)立即更換;不要在打開的容器瓶口正上方操作,容...
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2022-83
有下列情況者,對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),過高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里”。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)毒...
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2022-83
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使...
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2022-82
1.實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,超凈臺(tái)用紫外燈照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面,并開啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5-10min再開始實(shí)驗(yàn)操作。2.實(shí)驗(yàn)用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺(tái)內(nèi);實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)移出超凈臺(tái),以利于空氣的流通;實(shí)驗(yàn)完成后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面。3.每次操作只處理一種細(xì)胞;即使不同細(xì)胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基,避免細(xì)胞間的交叉污染。4.操作時(shí)小心取用無菌的物品,避免污染。勿碰觸吸管尖頭,不小心碰觸后應(yīng)立即更換;不要在打開的容器瓶口正上方操作,容...
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2022-82
細(xì)胞培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)這樣或那樣的問題,這些問題都是在細(xì)胞生長(zhǎng)方面來說,比如細(xì)胞的不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好,甚至死亡的原因,這些問題使得細(xì)胞研究者很是頭疼,下面是針對(duì)這些問題的原因和解決方法:一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因:1.胰蛋白酶消化過度;2.支原體污染;3.培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解);4.細(xì)胞老化;5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法:1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;2.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;3...
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