MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株培養(yǎng)說(shuō)明  

MCF-7/Adr為由MCF-7細(xì)胞構(gòu)建的耐Adr藥物細(xì)胞株。

細(xì)胞特性

1）來(lái)源：人乳腺癌細(xì)胞耐藥篩選

2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3）含量：>1×10^6  細(xì)胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

細(xì)胞處理

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mLwan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mLwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

注意：①細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度達(dá)80%左右時(shí)，方可添加400ng/mL ADR藥物；若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低ADR的濃度（shou次降低一半藥物濃度），或使用不含藥物的wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR濃度。

②建議復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。

2）細(xì)胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

①待細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1次，吸凈殘余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細(xì)胞細(xì)胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細(xì)胞全部脫落。迅速拿回操作臺(tái)，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。

④將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。

⑤向細(xì)胞沉淀中加入1~2mLwan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕吹混勻。將細(xì)胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個(gè)新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mLwan全培養(yǎng)基。

注意：細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過(guò)程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首ci降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞匯合度約80%，且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。

3）細(xì)胞凍存

①細(xì)胞凍存時(shí)，步驟同2）細(xì)胞傳代的①~④，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×10^6 ~ 1×107個(gè)細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意：細(xì)胞凍存過(guò)程中，不可添加藥物。

②將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)緩慢的原因及解決方法？

1、由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 2、培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞； 3、培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； 4、試劑保存不當(dāng)； 5、接種細(xì)胞起始濃度太低； 6、細(xì)胞已老化； 7、支原體污染 。 解決方法： 1、比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 2、換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子； 3、用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物； 4、血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清wan全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完； 1、增加接種細(xì)胞起始濃度； 2、換用新的保種細(xì)胞； 3、分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

懸浮細(xì)胞成簇或者成團(tuán)的原因及解決方法?

可能原因： 1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ； 2、支原體污染； 3、蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解； 4、DNA污染 。 解決方法： 1、用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液； 2、分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體； 3、用DNaseI處理細(xì)胞。

人白血病阿霉素耐藥株 K562/ADR

人卵巢癌腺癌阿霉素耐藥株 OVCAR-8/ADR

人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT-15+5FU

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251MG/TMZ

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株 MCF-7+adr

人舌鱗癌順鉑耐藥株 CAL 27+DDP

人口腔鱗癌順鉑耐藥株 SCC25+DDP

人胃癌順鉑耐藥株 AGS/DDP

人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株 ASPC-1/GEM

人卵巢癌順鉑耐藥株 SKOV3/DDP

人肺腺癌耐順鉑株 A549/DDP

人大細(xì)胞肺癌順鉑耐藥株 NCI-H460/cis

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO+5FU

胃癌順鉑耐藥株 SGC7901/DDP

吉非替尼耐藥PC-9GR PC-9GR

肺癌紫杉醇耐藥株A549+Taxol　 A549+Taxol　

人肺癌阿霉素耐藥株 A549/Adr

人肝癌阿霉素耐藥株 BEL7402/Adr

人膀胱癌阿霉素耐藥株 BIU-87/Adr

人結(jié)腸癌阿霉素耐藥株 HCT8/Adr

人胃癌阿霉素耐藥株 SGC7901/Adr

人結(jié)腸癌阿霉素耐藥株 hct116/Adr

人肝癌阿霉素耐藥株 SMMC-7721/Adr

人宮頸癌阿霉素耐藥株 Hela/adr

人胃癌阿霉素耐藥株 BGC823/adr

人卵巢癌阿霉素耐藥株 HO-8910/Adr

人乳腺癌順鉑耐藥株 MDA-MB-231/adr

人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株  HCT8/Taxol

人白血病紫杉醇耐藥株  K562/Taxol

人肝癌紫杉醇耐藥株  BEL7402/Taxol

人胃癌紫杉醇耐藥株  BGC823/Taxol

人宮頸癌紫杉醇耐藥株 Hela/Taxol

人結(jié)直腸腺癌紫杉醇耐藥株 HCT15/Taxol

人乳腺癌紫杉醇耐藥株 MDA-MB-231/Taxol

人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細(xì)胞株 HCT8/L

人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細(xì)胞株 hct116/L

人肝癌耐奧沙利鉑細(xì)胞株 SMMC-7721/L

人胃癌奧沙利鉑耐藥株 HGC27/L

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株 BEL7402/FU

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT8/FU

人胃癌氟尿嘧啶耐藥株 SGC7901/FU

人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5-Fu

人胃癌氟尿嘧啶耐藥株 BGC823/FU

人宮頸癌氟尿嘧啶耐藥株 Hela/FU

人肝癌順鉑耐藥株 BEL7402/DDP

人膀胱癌順鉑耐藥株 BIU-87/DDP

人結(jié)腸癌順鉑耐藥株 HCT8/DDP

人乳腺癌順鉑耐藥株 MCF7/DDP

人胃癌順鉑耐藥株 SGC7901/DDP

小鼠白血病順鉑耐藥株 L1210/DDP

人白血病順鉑耐藥株 K562/DDP

人肝癌順鉑耐藥株 Huh-7/DDP

人肝癌順鉑耐藥株 SMMC-7721/DDP

人卵巢癌順鉑耐藥株 HO-8910/DDP

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株 HCT15/DDP

人卵巢癌順鉑耐藥株 A2780/DDP

人胃腺癌耐藥株 AGS/DDP

人卵巢癌耐藥株 SK-OV-3/DDP

人乳腺癌順鉑耐藥株 MDA-MB-231/DDP

人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株 HCT8V

人肺癌吉非替尼耐藥株 A549/吉非替尼耐藥株

人肝癌索拉非尼耐藥株 HUH-7/Sorafenib

人神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤耐藥株 U343/TMZ

人肺癌吉西他濱耐藥株 A549/吉西他濱