養(yǎng)細(xì)胞的寶子們，收到細(xì)胞后先別著急處理細(xì)胞，花5分鐘仔細(xì)閱讀....

1、對于復(fù)蘇細(xì)胞

① 請按照說明書提前準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、因子、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件，提前將生物安全柜進(jìn)行酒精消毒和紫外滅菌。

② 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)基渾濁或污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

③ 細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時(shí)，在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時(shí)肯定需要提供。

④ 瓶內(nèi)充液培養(yǎng)基（運(yùn)輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。

⑤ 鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基，250g離心5分鐘，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的wan全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細(xì)胞，將細(xì)胞鋪瓶至新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)齊wan全培養(yǎng)基至6mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，立刻對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。

注：在快遞運(yùn)送過程中細(xì)胞因振動(dòng)會造成脫落現(xiàn)象，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代，未貼壁的細(xì)胞均需離心回收。

⑥ 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細(xì)胞明顯達(dá)到對數(shù)期，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用。

⑦ 由于細(xì)胞在運(yùn)輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時(shí)間顛簸，收到細(xì)胞進(jìn)行傳代后，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時(shí)間。

⑧ 市面上血清魚龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質(zhì)血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產(chǎn)冒充進(jìn)口）屢見不鮮，若客戶培養(yǎng)細(xì)胞過程中明顯感覺細(xì)胞生長速度不及預(yù)期，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補(bǔ)血清質(zhì)量的缺陷，以期提高細(xì)胞生長速度。

⑨實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將臺子內(nèi)的細(xì)胞放回培養(yǎng)箱，試劑放回冰箱，最后噴灑Deeming實(shí)驗(yàn)室安全衛(wèi)士，預(yù)防微生物污染，關(guān)閉生物安全柜，打開紫外滅菌30分鐘以上。

√特別提醒：

1.復(fù)蘇的細(xì)胞千萬千萬別放冰箱，冷凍冷藏都不可以，這是活細(xì)胞，不是試劑，切記?。?！

2.由于大部分的細(xì)胞系比較容易培養(yǎng)，以致于"問題血清“不能被及時(shí)發(fā)覺，但部分細(xì)胞對于血清品質(zhì)有嚴(yán)格要求，用“問題血清“培養(yǎng)細(xì)胞極易造成細(xì)胞脫落、死亡，務(wù)必要擦亮眼睛，選擇靠譜的血清供應(yīng)商。

2、對于凍存細(xì)胞

① 收到快遞后，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無干冰，請拍照后及時(shí)聯(lián)系供貨商。

② 收到細(xì)胞后請盡快復(fù)蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時(shí)需提供。

③ 復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴鍋處于實(shí)驗(yàn)室暴露、高溫、濕潤環(huán)境，極易滋生各種微生物，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生，大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍存細(xì)胞造成的污染。

④ 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作，凍存管、試劑、耗材拿進(jìn)去之前一定要用75%酒精消毒，培養(yǎng)試劑盡量不要共用，若有共用試劑，建議配成完培后整體過濾除菌。

⑤ 原代細(xì)胞傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用，原代細(xì)胞需根據(jù)生長狀況判斷傳代比例。

⑥ 第一次傳代時(shí)需要摸索消化時(shí)間，建議每隔30s就觀察一次，并記錄消化時(shí)間，細(xì)胞會隨著后期傳代次數(shù)的增多而延長消化時(shí)間。

⑦ 由于細(xì)胞在運(yùn)輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時(shí)間顛簸，收到細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇后，前1-2代培養(yǎng)可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時(shí)間。

⑧ 原代細(xì)胞建議選用廠家供應(yīng)的專用培養(yǎng)基，否則可能會因?yàn)楦淖兣囵B(yǎng)條件，大大縮短細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù)，造成種子細(xì)胞的浪費(fèi)。

⑨ 及時(shí)更換和補(bǔ)充培養(yǎng)箱水盤內(nèi)的水，建議加入Deeming細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤安全衛(wèi)士進(jìn)行污染物的預(yù)防。

⑩ 購買的細(xì)胞僅供科研使用，不得用于人體或其他?。。?！