細(xì)胞凍存&細(xì)胞復(fù)蘇

更新時(shí)間：2022-04-08

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03細(xì)胞凍存：

試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養(yǎng)基；

流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶，滲透壓會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí)，會(huì)散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。

因?yàn)榧?xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過(guò)夜，最后放入液氮罐。

04細(xì)胞復(fù)蘇：

試劑：含血清的培養(yǎng)基；

流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開(kāi)凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養(yǎng)液。

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